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免疫組化（IHC）SP法，原來(lái)如此簡(jiǎn)單！

免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理-抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。一、SP法步驟1.SP三步法脫蠟→梯度水化→滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶→抗原修復(fù)→封閉→一抗孵育→二抗孵育→SP反應(yīng)→DAB顯色→蘇木素復(fù)染→常規(guī)脫水→透明→封片2、免疫組化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)①脫蠟和水化②抗原修復(fù)③滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶和...

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WB-考馬斯亮藍(lán)染色法

一、考馬斯亮藍(lán)結(jié)構(gòu)考馬斯亮藍(lán)R-250和G-250染料是二磺酸化三苯基甲烷化合物的兩種化學(xué)形式，結(jié)構(gòu)上R-250比G-250少了2個(gè)甲基。二、蛋白質(zhì)染料要求用染料和生物大分子結(jié)合形成有色的復(fù)合物是電泳后檢測(cè)常用的方法。選用染料通常應(yīng)考慮以下要求：1.必須與大分子結(jié)合以形成一個(gè)不溶性的，有色的，緊密的復(fù)合物，但不結(jié)合到凝膠中和支持膜上，以便從凝膠中除去，否則高背景會(huì)影響蛋白帶的辨別和定量掃描。2.染料必須容易溶解在對(duì)大分子沒(méi)有影響的溶劑中，以利于背景的脫色。3.選用高吸光系數(shù)的...

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細(xì)胞凍存的小Tips

細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，直接影響細(xì)胞存活率和活力，關(guān)系到后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)芊癜凑沼?jì)劃有效地進(jìn)行。掌握好細(xì)胞凍存的小Tips，有助您做好細(xì)胞培養(yǎng)式樣，讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞凍存的基本原則細(xì)胞凍存遵循“慢凍”原則：讓細(xì)胞在超低溫環(huán)境中緩慢進(jìn)入“冬眠”狀態(tài)，暫時(shí)停止其代謝活動(dòng)。目的是保存細(xì)胞樣本，方便復(fù)蘇。二、細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)1.溫度控制不穩(wěn)定可能導(dǎo)致細(xì)胞存活率降低二甲基亞砜（DMSO）或甘油常作為冷凍保護(hù)劑，保護(hù)細(xì)胞。DMSO能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍...

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Elisa試劑盒怎么選？

在選擇ELISA試劑盒時(shí)，不同的用戶往往有不同的選擇標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)論是靈敏度、樣本類型還是簡(jiǎn)便性，核心標(biāo)準(zhǔn)是ELISA試劑盒的重現(xiàn)性。一、試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測(cè)樣本的種類一般來(lái)說(shuō)，生產(chǎn)廠家都會(huì)在產(chǎn)品名稱上標(biāo)明種屬，ELISA試劑盒種屬:人、小鼠、大鼠、兔、猴等。待檢樣本種類：體液、血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿等。二、試劑盒的檢測(cè)范圍就是標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，特別要注意待測(cè)樣本濃度是否落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，對(duì)于高濃度樣本，需要先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測(cè)定樣本。三...

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小鼠給藥操作

一、實(shí)驗(yàn)小鼠的選擇挑選實(shí)驗(yàn)小鼠一般都是根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求來(lái)篩選品系、品種，在小鼠年齡、體重、生理健康等方面要格外注意?；旧现灰獫M足以下注意事項(xiàng)，就能挑選到合適滿意的小鼠。1、首先要考慮小鼠是否符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。2、按照實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵髞?lái)選擇。3、不同季節(jié)和晝夜不同時(shí)間，動(dòng)物機(jī)體反應(yīng)性有一定改變4、不同種、同種而不同品系的小鼠對(duì)同一實(shí)驗(yàn)處理反應(yīng)有很大差別。5、年齡應(yīng)盡可能一致，體重應(yīng)大致相近，一般不應(yīng)相差10%。6、小鼠性別，在實(shí)驗(yàn)研究中，如無(wú)特殊要求，一般宜雌雄各半，以避免由于性別差異...

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